产品货号:
ZN1874
中文名称:
微量BCA蛋白质定量试剂盒
英文名称:
产品规格:
1盒
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
试剂盒特点:
试剂盒组成:
保存:室温保存,一年有效。
标准品以及工作液的制备:
使用方法:
一、微孔板测定法
二、试管测定法
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- 超敏感,最低检测浓度为0.5μg/mL。
- 线性范围在0.5~20μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。
- 对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。
- 比Lowry法更加简单快捷。
- 试剂稳定,室温可以放置一年。
- 终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
- 最短可以检测双肽,适合于分子量较小的蛋白质。
- 有常规(普通试管)和微量(96孔板)两种检测模式。
试剂盒组成:
组分 | 规格 |
溶液A | 100mL |
溶液B | 100mL |
溶液C | 5mL |
蛋白标准品 | 20mL(2mg/ml) |
保存:室温保存,一年有效。
标准品以及工作液的制备:
- 牛血清白蛋白标准品稀释液的制备
管号 稀释液体积 BSA标准品体积 终浓度 A 980μL 20μL(标准品原液中取) 40μg/ml B 400μL 400μL(从A管取) 20μg/ml C 400μL 400μL(从B管取) 10μg/ml D 400μL 400μL(从C管取) 5μg/ml E 400μL 400μL(从D管取) 2.5μg/ml F 600μL 400μL(从E管取) 1μg/ml G 400μL 400μL(从F管取) 0.5μg/ml H 800μL 0 0μg/ml(空白孔)
注意:上表适用于微孔板法的标准品稀释,试管法的标准品稀释可按照具体使用量进行比例扩大。 - 微量BCA工作液的制备
- 使用下列公式计算出所需工作液的总体积:
(标准孔数+待测样品孔数)×(重复数)×(每个样品孔的工作液体积) =所需工作液的总体积
例如:标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复(8个标准孔+ 3个待测样品孔)×(2重复)×(1mL) = 22mL BCA工作液(可以多配到25mL)。
注意:在试管检测法中,每个样品需要1mL的工作液,在微孔板检测中,每个样品需要150μL的工作液。 - 配制BCA工作液:
先将溶液A、溶液B和溶液C按50:48:2的比例混合,所得溶液即BCA工作液。比如:5mL溶液A + 4.8mL溶液B +200μL溶液C。
注意:试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时,会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。
- 使用下列公式计算出所需工作液的总体积:
使用方法:
一、微孔板测定法
- 吸取150μL的标准品及未知样品分别至微孔板中。
- 滴加150μL的工作液到每孔中并充分混合30秒。
- 盖上微孔板并在37℃孵育2小时或60℃放置1小时。
- 微孔板冷却至室温。
- 10分钟内在酶标仪上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
- 绘制标准曲线,测量样品的浓度。
二、试管测定法
- 吸取1.0mL的标准品及未知样品分别至对应标记的检测管中。
- 滴加1.0mL的工作液至每管中并充分混合。
- 盖上检测管并于60℃水浴孵育1个小时。
- 所有试管冷却至室温。
- 10分钟内在分光光度计上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
- 绘制标准曲线,测量样品的浓度。
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